Eletroforese de Hemoglobinas

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Definição: Técnica de separação e quantificação relativa da hemoglobina em frações, capaz de identificar a presença (ou ausência) de hemoglobinas variantes, bem como eventuais alterações nas proporções de hemoglobinas normais.

Sinônimos: Eletroforese de Hb; Separação eletroforética da hemoglobina; Eletroforese de hemoglobina - Sangue.

Introdução

A eletroforese de hemoglobina é uma técnica técnica antiga (porém que foi se aperfeiçoando ao longo do tempo), relativamente barata, rápida e eficaz de identificação e separação das frações da hemoglobina.

A hemoglobina (Hb) é uma proteína alostérica, formada pelo grupamento HEME (unidade não peptídica, comum a todas as formas de Hb, que é constituido por um anel tetrapirrólico com um íon de ferro), associado a quatro cadeias polipeptídicas.

É a principal molécula constituinte das hemácias, cuja principal função fisiológica é o transporte de gases sanguíneos, especialmente o oxigênio (O ₂ ) e o gás carbônico (CO ₂ ).

Em indivíduos normais, na vida pós-natal são encontrados três tipos diferentes de hemoglobina, da maior para a menor em termos proporcionais: hemoglobina A (Hb A), hemoglobina A2 (Hb A2) e hemoglobina fetal (Hb F).

Em cada hemoglobina do adulto, são identificadas duas cadeias globulínicas alfa, associadas a outras duas cadeias não alfa, do tipo beta, delta ou gama (totalizando quatro cadeias polipeptídicas). O arranjo dessas cadeias é o que diferencia os tipos de hemoglobina normais existentes: Hb A (alfa 2 beta 2), Hb A2 (alfa 2 delta 2) e Hb F (alfa 2 gama 2).

Foram descritas dezenas de hemoglobinas variantes, as quais, em sua maioria, são resultado da substituição de apenas um único aminoácido da cadeia polipeptídica. Apesar dessa grande quantidade de variantes, somente uma parte delas apresenta significado e repercussões clínico-hematológicas.

Quando submetida a uma corrente elétrica, em um substrato específico com uma solução tampão, os diferentes tipos de hemoglobinas são separados, sendo quantificados em seguida.

Sua migração depende, dentre outros fatores, de sua interação com o substrato, do pH do tampão, e da carga iônica. Em alguns casos, uma investigação adicional com outros exames (ex.: métodos moleculares) pode ser necessária para diagnóstico e classificação.

Solicitação

Indicações:

Diagnóstico de hemoglobinopatias e talassemias;
Determinação da proporção de hemoglobinas;
Avaliação de alguns casos de anemia hemolítica;
Diagnóstico diferencial de anemias;
Confirmação de alterações encontradas no teste de triagem neonatal;
Estudo e aconselhamento familiar.

Como solicitar: Eletroforese de hemoglobinas.

Orientações de Coleta

Orientações ao paciente: não é necessário nenhum preparo específico. Informar a data de eventual hemotransfusão recente ou se já foi submetido a transplante de medula óssea. Relatar medicações em uso;
Tubo para sangue total (tampa roxa - EDTA). Após a coleta, homogeneizar o sangue, acondicionando a amostra sob refrigeração (2-8 ^o C);
Material: sangue;
Volume recomendável: 3,0 mL.

Tubo para sangue total - tampa roxa - EDTA. Ilustração: Caio Lima

Valores de Referência

Componente	Relativo (%)
Hb A	95-98
Hb A ₂	1,5-3,5
Hb F	< 2
Hb S	Ausente
Hb C	Ausente

Observação 1! A proporção de hemoglobina fetal é maior em recém-nascidos, decaindo a níveis adultos em torno de 2 anos de idade;
Observação 2! Os valores de referência da eletroforese de hemoglobina podem variar de acordo com o laboratório clínico e a metodologia utilizada.

Interferentes/Limitações

Transfusão sanguínea antes do exame pode levar a resultados inconsistentes; [cms-watermark]
Algumas hemoglobinas anormais podem não ser detectadas em determinadas metodologias; [cms-watermark]
Em alguns casos, por característica da técnica, algumas hemoglobinas variantes podem se sobrepor a outras frações, dificultando sua interpretação; [cms-watermark]
Amostras coaguladas inviabilizam a realização do exame; [cms-watermark]
A depender da alteração encontrada, uma investigação adicional com outros exames (ex.: métodos moleculares) pode ser necessária para diagnóstico e classificação;
Resultados atípicos podem ser encontrados em pacientes que realizaram transplante de medula óssea;
Algumas medicações (ex.: hidroxiureia , decitabina ) podem alterar as proporções das frações da hemoglobina.

Causas de Alterações

Hemoglobinopatias;
Talassemias;
Anemia hemolítica;
Drogas.

Autoria

Autoria principal: Pedro Serrão Morales (Patologia Clínica e Medicina Laboratorial).

Referências Bibliográficas

Franco E, Karkoska KA, McGann PT. Inherited disorders of hemoglobin: A review of old and new diagnostic methods. Blood Cells Mol Dis. 2024; 104:102758.

Higgins V, MacNeil L, Sosova I, et al. Hemoglobin variant in disguise. Clin Biochem. 2023; 118:110589.

Kanaan S, Garcia MAT, Xavier AR. Bioquímica Clínica. 3a ed. Rio de Janeiro: Atheneu, 2022.

Xu M, Li MY, Zeng Y, et al. Use of Capillary Electrophoresis Migration Position for the Presumptive Identification of Hemoglobin Variants Prevalent in China. Hemoglobin. 2022; 46(6):330-334.

Kanaan S. Laboratório com interpretações clínicas. Rio de Janeiro: Atheneu, 2019.

Pagana KD, Pagana TJ, Pagana TN. Mosby’s Diagnostic & laboratory test reference. 14th ed. St. Louis: Elsevier, 2019.

Riou J, Szuberski J, Godart C, et al. Precision of CAPILLARYS 2 for the detection of hemoglobin variants based on their migration positions. Am J Clin Pathol. 2018; 149(2):172-180.

Oliveira JL. Diagnostic strategies in hemoglobinopathy testing, the role of a reference laboratory in the USA. Thalassemia Reports. 2018; 8(1):7476.

McPherson RA, Pincus MR. Henry's clinical diagnosis and management by laboratory methods. 23rd ed. St. Louis: Elsevier, 2017.

Brancaleonai V, Di Pierro E, Motta I, et al. Laboratory diagnosis of thalassemia. Int J Lab Hematol. 2016; 38 Suppl 1:32-40.

Jacobs DS, DeMott WR, Oxley DK. Jacobs & DeMott laboratory test handbook with key word index. 5th ed. Hudson: Lexi-Comp Inc., 2001.